Метод NYLAR , предназначенный для количественного определения иммуногенности модифицированных живых вирусных антирабических вакцин, относится к категории методов, основанных на титровании антигена. Мышей иммунизируют путем однократного внутрибрюшинного введения вакцины и проверяют степень иммунитета инъекцией вируса, но не интрацеребральной, как обычно, а внутримышечной. Определяется первичная реакция на вакцину, что позволяет исключить или свести до минимума «бустерный» (стимулирующий) эффект множественных инъекций вакцины или инфицирующего вируса.

Чтобы исключить различия в реакции на антиген, обусловленные возрастом, полом или линией мышей, пользуются стандартной эталонной вакциной, обладающей высокой антигенностью.

Мышей делят на группы (по 15 на каждое разведение) и иммунизируют путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл трое- или пятикратных разведений испытываемой и эталонной вакцин. В идеале доза должна быть подобрана таким образом, чтобы диапазон защиты иммунизированных мышей после введения инфицирующего вируса варьировал от 100% в группе животных, получивших максимальное количество вакцины, до 0 в группе животных, получивших минимальное количество. Через 21 день после иммунизации производится заражение путем введения суспензии мышиного мозга, инфицированного штаммом CVS фиксированного вируса. Суспензия вводится в мышцу бедра в количестве, достаточном, чтобы вызвать гибель не менее 50% мышей, получивших минимальную дозу эталонной вакцины; смертность контрольных животных должна составлять 100%.

Наилучшие результаты получают при титре инфицирующего вируса 10:6 или выше (по данным титрования на молодых взрослых мышах путем интрацеребрального введения в дозе 0,03 мл). Согласно требованию метода NIH, действие испытываемой вакцины должно быть равным или превышать действие стандартной эталонной вакцины. Предварительные испытания позволяют считать, что метод NYLAR может быть также использован для оценки иммуногенности вакцин, содержащих инактивированный вирус. Если иммуногенность вакцин такова, что не позволяет производить многократных разведений, то можно пользоваться однократным разведением.

Эталонная вакцина для данного теста должна быть получена в официальной организации, а ее иммуногенность тщательно проконтролирована. Так, при испытании вакцины LEP эталонная вакцина должна иметь титр не менее 10:3-5 (по данным титрования на молодых взрослых мышах путем интрацеребрального введения) и отвечать требованиям защитного теста на морских свинках.